PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

1.1.4 Prueba de Lieberman Se basa en la reacción coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen como núcleo el ciclo pentanoperhidrofenantreno. 124 . 1.1.5 Prueba de saponificación Es una prueba para identificar ácidos grasos, por lo tanto, general para los lípidos que los contengan.


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EXPERIMENTO 10

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

OBJETIVOS
Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su identificación
REQUISITOS
Repasar las estructuras de los lípidos y sus reacciones.
1. FUNDAMENTOS

Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza antipática, es decir que contienen regiones hidrofóbicas y regiones hidrofílicas (figura 1). La mayor parte de los lípidos abundantes en la
+
/K
+
. A diferencia de los carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos, no forman polímeros, son mas bien moléculas pequeñas que presentan una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las
Figura 1 Cabeza-Cola de los ácidos grasos CH3COOHCOHO
CH3CABEZA CABEZACOLA COLA

122
Figura 2 Isomería CIS-TRANS de los ácidos grasos, puentes de hidrógeno con el agua y su ionización

CH3COOH
CH3
COOH
CISTRANS

TRANS
COOHOHOHHH
CH3R-COOH
R-COO + H+-

HC
HCCOOH
COOH
HCCH
H3CÁcido Oleico CIS(p.f. 13o -16o)(p.f. 44o)Ácido Elaídico TRANS

Figura 3 Saponificación de un ácido graso

3HCCOOH
Ácido Palmítico
NaOH
COONa
3HCPalmitato de sodi
o
(Jabón)
Cabeza PolarCola Apolar 123
1.1 Fundamentos químicos de las pruebas para lípidos.
1.1.1 Prueba de acroleína
La positividad de esta reacción indica la presencia de glicerina y se manifiesta por el desprendimiento de vapores blancos irritantes de olor desagradable, cuya reacción se muestra en la siguiente figura.
Figura 4 Reacción de la prueba de la acroleína
CH2OH
CHOH
CH2OH
CH2
CH
CO
HSO4HK, 2 H2OGLICERINAACROLEINA1.1.2 Prueba de fusión (para investigar fósforo)
La positividad de esta reacción indica la presencia de fósforo inorgánico. Las sustancias orgánicas dan la reacción positiva, siempre que se haga una hidrólisis previa. La reacción positiva se manifiesta por la reacción de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio. (Figura 5)
Figura 5 Reacción de la prueba de fusión

(NH
4
)
6
Mo
7
O
24
. 4H
2
O pH ácido (P) (NH
4
)
3

4103)(OMop
(Molibdato de amonio) (Fosfomolibdato de amonio)

1.1.3 Prueba de Iodo:

La positividad de esta reacción indica la presencia de ácidos grasos de la serie etilénica. La reacción positiva se manifiesta por la desaparición del color del Yodo, debido a que enlaza en el doble enlace (figura 6)

Figura 6 Reacción de la prueba de Iodo
I I
| |
CH
3
-(CH
2
)
7
-CH=CH-(CH
2
)
7
-COOH I
2
CH
3
-(CH
2
)
7
-CH-CH-(CH
2
)
7
-COOH
(ácido oleico) (Di-iodo-9,10-ác.esteárico)

1.1.4 Prueba de Lieberman

Se basa en la reacción coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen como núcleo el ciclo pentanoperhidrofenantreno.
124

1.1.5 Prueba de saponificación
Es una prueba para identificar ácidos grasos, por lo tanto, general para los lípidos que los contengan. Los jabones se define químicamente como, las sales metálicas de los ácidos grasos superiores. La figura 7 muestra la formación de un jabón

Figura 7 Prueba de saponificación

CH2-OOC-(CH2)14-CH3 CH2OH
| |
CH-OOC-(CH2)14-CH3 CH.OH + 3 CH3-(CH2)14-COONa
| |
CH2-OOC-(CH2)14-CH3 CH2OH

Tripalmitoil-glicerol Glicerol Palmitato de sodio
(Tripalmitina) (Jabón) 2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Materiales
Tubos de ensayo, mechero y pinzas de madera

2.2 Métodos
Prueba
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar:
Volumen
2.2.1.
P. Solubilidad
Sustancia problema
1 ml

Probar solubilidad por separado con éter, cloroformo y agua. Mezclar y observar.
1

2.2.2.
P. Coloración
Sustancia problema
2 ml

Solución del colorante Sudán IV Agitar, dejar en reposo y observar, los lípidos toman la coloración.
1
2.2.3.
P. Acroleína
Sustancia problema1 g. de la sustancia problema.
0,5

SO
4
HK.
1 ml

Calentar fuertemente y observar si se desprenden vapores blancos irritantes, de olor desagradable.

125

Prueba
Procedimiento
En un tubo de ensayo colocar:
Volumen
2.2.4.
P. Fusión
Sustancia problema
0,5 ml

Mezcla de carbonato de sodio y nitrato de potasio (se prepara en el momento de usarla Carbonato de sodio al 2% y nitrato potásico al 2%. El reactivo se prepara con dos partes de carbonato sódico y una parte de nitrato potásico)
2 ml

Agua caliente (+80ºC
2 ml

Mezclar y dejar en reposo durante 10’
10 min

Ácido nítrico
1

Mezclar, calentar suavemente a la llama sin dejar hervir Molibdato de amonio 4%
1 ml

Mezclar y observar. La positividad se manifiesta por la formación de un precipitado de fosfomolibdato de amonio.

2.2.5
P. Iodo
Sustancia problema
1 ml

Cloroformo. Mezclar
1 ml

Reactivo de Hübl
1 gota

Mezclar y observar. Reacción (+) desaparición del color del Yodo. Esperar 5’ para ver la reacción

2.2.6
P. Lieberman
Sustancia problema
0,5 ml

Anhídrido acético. Agitar
1 ml

H
2
SO
4
concentrado Agitar suavemente y observar Reacción (+) coloración verde..

2.2.7.
P. Saponificación
Sustancia problema (En una cápsula de porcelana colocar)
6 ml

Calentar ± 80ºC
0.5 ml

En un tubo de ensayo colocar: 1.5 ml de KOH al 85% y 1 ml. de glicerina, calentar ± 80ºC. Agregar esta mezcla al contenido de la cápsula Calentar a la llama.
2 min

Dejar enfriar y observar Colocar en tubo de ensayo una porción del producto obtenido, agregar 5 ml. de agua y agitar. Esto se hace con el fin de observar sus propiedades espumantes 3. AUTO-EVALUACIÓN.
1. Diga cuáles son los fundamentos químicos de las pruebas estudiadas.
2. Cuales son las aplicaciones prácticas de las pruebas.
3. Para el colesterol diga cuales pruebas y porque serán positivas.
4. Defina los siguientes términos: aminoácidos, proteínas, análisis cualitativo, cuantitativo.
5. Dibuje las reacciones para formar un jabón con 3 moléculas de ácido oleico
6. Efectué un enlace ester.
126

4. Marcha analítica

LIPIDOS
Insolubles en agua
Solubles en los solventes orgánicos
Se colorean con colorantes especiales

Prueba de Acroleína (+) (-)
Vapores irritantes de acroleína no hay acroleína

Prueba de fusión
(Investigar fósforo)

Glicéridos o Fosfoglicéridos
Colesterol, céridos, esfingomielinas o cerebrósidos

(+) (-) (+) (-) Precipitado No hay precip. Color verde Otros colores
Prueba de
(-) (+) Fusión
Color del Yodo Desaparece el color del Yodo (investigar
Fósforo)


Saponificable Saponificable
(-)
No hay precipit.
Practicar
Saponificación (+)
Precipitado
Fosfoglicéridos
Céridos
Cerebrósidos
Grasas
neutras
Ac. grasos
etilénicos
Ac. grasos
saturados
Colesterol
Céridos
Esfingomielinas
Cerebrósidos

Esfingomielinas

127
5. INFORME 10 (PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LÍPIDOS)

Apellidos

Nombres

Grupo de prácticas

N° del mesón

Fecha

N del estudiante

Calificaciones
Entrada

Desarrollo

Informe

Definitiva 1. Complete el siguiente cuadro con la información deseada. En la casilla “N
0
Muestra”, coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. Use los signos (+) o (-), para reportar la positividad o negatividad de la reacción. Sobre la base de los resultados de sus pruebas, Ud. puede identificar la muestra problema y escribir la composición mas resaltante en las casillas correspondientes.

N
0
Muestra
Agua Éter Solubilidad
Cloroformo P. coloración P. acroleína P. fusión P. Lieberman P. Iodo P. Saponificación Nombre
Del lípido de la
muestra
problema

Anote para cada tubo la composición del lípido identificado por Ud. según las reacciones que utilice

Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la práctica, sin anexar hojas.
128

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